Pharmaceutical Technology Brasil Ed. 3-19

Pharmaceutical Technology 89 Edição Brasileira - Vol. 23 / Nº3 dos não mostrados). Após a indução do IPTG, pode-se observar um início e um aumento da concentração de GFP. A concentração final do produto aumentou dentro de 1 a 2 horas após a indução até um máximo de 120 mg GFP.g.CDW-1 (Fig. 6 e 7). O crescimento de E. coli Bl 21 em frascos de agitação utili- zando triptona ou peptona da levedura HYP-A é muito baixo (Fig. 3). No entanto, quando combinado com um extrato de levedura, especialmente o YE3, a peptona de levedura HYP-A leva ao maior crescimento e expressão proteica (resultados não mostrados). A combinação de peptona de levedura HYP-A e extrato de levedura YE3 foi selecionada para experimentos em fermentadores (Figuras 4,5,6 e 7). A produção de GFP de E. coli Bl 21 em fermentadores foi avaliada em toda a cultura. O gel SDS Page (Fig. 6) descreve uma banda GFP que aumenta com a duração da cultura. A produção de GFP de E. coli Bl 21 em fermentadores tam- bém foi avaliada por medidas de fluorescência. A fluorescência de GFP geral após culturas em fermentadores de 24 horas está apresentada na Fig. 7. Mais uma vez, o extrato de levedura YE3 em combinação com a peptona de levedura HYP-A apresentou o maior rendimento de GFP. Conclusão A linha de produtos Procelys ProCel®, que tipicamente possui alta solubilidade, filtrabilidade e consistência, promove rápido crescimento microbiano e garante alta produtividade. Com seu histórico de desempenho robusto, eles são especialmente pro- jetados para atender aos padrões de qualidade exigidos pelas indústrias biofarmacêuticas e de cultura de células. Aqui apresentamos os dados que destacam o desempenho do extrato de levedura (YE) e da peptona de levedura (YP) da ProCel® para alcançar alto rendimento de proteína ao usar a E. coli BL21-DE3 expressando GFP como a cepa modelo. Os re- sultados demonstraram que a peptona convencional conhecida como triptona pode ser substituída com sucesso pela peptona de levedura em todas as experiências que proporcionam benefí- cios suplementares no desempenho e produtividade das células em conjunto com o extrato de levedura. Os resultados também indicam fortemente que um procedimento de seleção cuidadosa de fontes de nitrogênio é crítico para alcançar uma produção biofarmacêutica consistente e de alto rendimento. Sumário Como a Escherichia coli é o hospedeiro bacteriano mais comum para a produção de moléculas recombinantes de alto valor, o desenvolvimento de meios de cultura específicos que suportam tanto o crescimento quanto a expressão de proteínas é de suma importância. Neste propósito, os Laboratórios de Aplicações da Procelys Biotech desenvolveram um ensaio de desempenho bioló- gico usando GFP como ummarcador de expressão. Vários extratos de levedura da gama ProCel® e peptona de levedura foram então investigados separadamente ou em combinação para o crescimen- to de E. coli BL21 e produção de GFP. A estratégia experimental permite alcançar altas densidades celulares e produção de GFP enquanto reduz a formação de acetato. Os resultados do estudo mostram que selecionar o extrato de levedura e a peptona de levedura ideais é crítico para a alta produtividade de proteína. Além disso, essas descobertas fornecem mais informações sobre FIGURA 6 Análise de SDS-PAGE da amostra de ensaios em fermentadores FIGURA 7 Produção de GFP de amostras de ensaios em fermentadores a experiência da Procelys no desenvolvimento de uma nova linha de produtos especialmente dedicada à produção de proteínas recombinantes n Literatura 1. Waegeman and al.”Increasing recombinant protein production in E. coli through metabolic and genetic engineering”, J ind Microbiol Biotechnol, 2011, 38:1891-910 2. Robert L. McKown “Development of Biotechnology Curriculum for the biomanufac- turing industry”, The official journal of ISPE, 202, vol.22 No.3 3. Lee SY “High cell-density culture of Escherichia coli”, Trends Biotechnol, 1996, 14 (3): 98–105 4. Riesenberg and al. “High-cell-density cultivation of Escherichia coli at controlled specific growth rate”, Journal of Biotechnology, 20, 1991, 17-28 6. M.Chalfieandal.“GreenFluorescentproteinasamarkerforgeneexpression”,science, New Series, Vol. 263, Feb. 11, 1994, pp. 802-805 7. Riesenberg and al. “High-cell-density cultivation of Escherichia coli at controlled specific growth rate”, Journal of Biotechnology, 20, 1991, 17-28 8. Luttmann R., Hartkopf J., Ross A. (1992) Growth Controlled Fed-Batch Cultivations - Theory, Development of Control Strategies and Experimental Verification —. In: Furusaki S., Endo I., Matsuno R. (eds) Biochemical Engineering for 2001. Springer, Tokyo.